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动物血清的常见问题及处理方法

发布日期: 2019-12-24
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动物血清的常见问题及处理方法!
         
最近在培养细胞中使用胎牛血清,由于发现有沉淀,不知是否变质,在查阅相关文献也没有得到确切的答案.因此不敢再用原来的血清,导致浪费.在这提醒大家做细胞培养时,要注意血清的分装.   

血清是细胞培养中最重要的元素之一。在实验室操作中要注意的事项及处理方法如下:

1. 血清保存 : 建议血清应保存在-5至-2O。然而,若存放于4时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。
2. 解冻血清的方法 : 建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。
3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?
血清中沉淀物的出现有许多种原因,但常见的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。
若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。
4. 为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
5. 有必要做热灭活吗?
实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量!
6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?
胎牛血清没有预老化,储存在2-8时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20储存胎牛血清,避免反复冻融。
7. 如何避免沉淀物的产生?
解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20至4至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20至37),实验显示非常容易产生沉淀物。
解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
请勿将血清置于37太久。若在37放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。
血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
若必须做血清的热灭活,请遵守56,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

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